PHÂN LẬP VÀ TẠO DÒNG NGUYÊN BÀO SỢI (FIBROBLAST) NGƯỜI TỪ BÁNH NHAU

Luận văn: PHÂN LẬP VÀ TẠO DÒNG NGUYÊN BÀO SỢI (FIBROBLAST) NGƯỜI TỪ BÁNH NHAU

Giá: 50K


PHẦN I : GIỚI THIỆU VỀ ĐỀ TÀI
I. ĐẶT VẤN ĐỀ ............................................................................................................... 1
II. MỤC TIÊU ĐỀ TÀI...................................................................................................... 5
II.1 MỤC TIÊU TỔNG QUÁT....................................................................................... 5
II.2 MỤC TIÊU CỤ THỂ ................................................................................................ 5

PHẦN II : TỔNG QUAN TÀI LIỆU
I. SỰ HÌNH THÀNH VÀ PHÁT TRIỂN CỦA NHAU....................................................... 6
I.1 VỊ TRÍ LÀM TỔ CỦA PHÔI .................................................................................... 6
I.2 CÁC THÀNH PHẦN CẤU TẠO CỦA NHAU.......................................................... 6
I.2.1 BÁNH NHAU ...................................................................................................... 6
I.2.2 MÀNG ỐI ............................................................................................................ 7
I.2.3 MÀNG ĐỆM........................................................................................................ 7
I.2.4 HỒ MÁU HAY KHOẢNG GIAN GAI NHAU.................................................... 7
I.2.5 VÁCH NHAU ..................................................................................................... 7
I.2.6 MÚI NHAU.......................................................................................................... 7
I.2.7 ĐĨA ĐÁY ............................................................................................................. 8
I.2.8 VÒNG VIỀN HAY BỜ GIỚI HẠN NGOẠI VI.................................................... 8
I.2.9 DÂY RỐN............................................................................................................ 8
I.2.10 MÀNG NHAU.................................................................................................... 8
I.3 SỰ TẠO NHAU ....................................................................................................... 9
I.3.1 SỰ TẠO NHAU TỪ PHÍA CON............................................................................ 10
I.3.1.1 SỰ TẠO TÚI ĐỆM.................................................................................... 10
I.3.1.2 SỰ TẠO CÂY GAI NHAU (SỰ TẠO ĐĨA ĐỆM) ................................... 10
I.3.2 SỰ TẠO NHAU TỪ PHÍA MẸ ............................................................................. 12
I.3.2.1 CẤU TRÚC MÔ HỌC NỘI MẠC TỬ CUNG........................................... 12
I.3.2.2 SỰ PHÁT TRIỂN CỦA MÀNG RỤNG THÀNH...................................... 12
I.3.2.3 SỰ PHÁT TRIỂN CỦA MÀNG RỤNG BAO ........................................... 13
I.3.2.4 SỰ PHÁT TRIỂN CỦA MÀNG RỤNG ĐÁY........................................... 13
I.4 CHỨC NĂNG CỦA NHAU ...................................................................................... 14
I.4.1 CHỨC NĂNG TRAO ĐỔI CHẤT ................................................................... 14
I.4.2 CHỨC NĂNG BÀI TIẾT HORMONE ............................................................ 15
I.4.3 CHỨC NĂNG MIỄN DỊCH............................................................................. 15
II. ĐẠI CƯƠNG VỀ NGUYÊN BÀO SỢI ...................................................................... 16
II.1 ĐẶC ĐIỂM CHUNG............................................................................................ 16
II.2 TẾ BÀO SỢI (FIBROCYTE) ............................................................................... 18
II.2.1 NGUỒN GỐC ............................................................................................... 18
II.2.2 HÌNH DẠNG ................................................................................................. 19
II.2.3 CHỨC NĂNG................................................................................................ 21
II.3 NGUYÊN BÀO SỢI (FIBROBLAST) ...................................................................... 21
II.3.1 NGUỒN GỐC.................................................................................................. 21
II.3.2 HÌNH DẠNG................................................................................................... 22
II.3.3 CHỨC NĂNG.................................................................................................. 23
II.3.4 KHOẢNG ĐỜI ................................................................................................ 25
III. CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN VIỆC NUÔI TẾ BÀO......................................... 25
III.1 GIÁ THỂ .............................................................................................................. 25
III.2 PHA KHÍ .............................................................................................................. 26
III.2.1 OXYGEN ................................................................................................... 26
III.2.2 CO2............................................................................................................... 27
III.3 MÔI TRƯỜNG VÀ CÁC YẾU TỐ BỔ SUNG.................................................... 27
III.4 ĐẶC TÍNH VẬT LÝ ........................................................................................... 29
III.4.1 PH.................................................................................................................. 29
III.4.2 DUNG DỊCH ĐỆM.................................................................................................... 29
III.4.3 ÁP SUẤT THẨM THẤU............................................................................ 30
III.4.4 NHIỆT ĐỘ ................................................................................................. 30
III.4.5 TÍNH NHỚT ............................................................................................... 30
III.4.6 ÁP LỰC SỨC CĂNG BỀ MẶT VÀ SỰ TẠO BỌT................ ................... 30
IV. KHÁI QUÁT VỀ MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT..................... 31
IV.1 THÀNH PHẦN MÔI TRƯỜNG........................................................................... 31
IV.1.1 DUNG DỊCH MUỐI ĐỆM.......................................................................... 31
IV.1.2 AMINO ACID............................................................................................. 32
IV.1.3 VITAMINE ................................................................................................. 32
IV.1.4 MUỐI ......................................................................................................... 32
IV.1.5 GLUCOSE.................................................................................................. 33
IV.1.6 HUYẾT THANH......................................................................................... 33
IV.2 MỘT VÀI LOẠI MÔI TRƯỜNG ĐƯỢC SỬ DỤNG TRONG NUÔI CẤY TẾ BÀO VÀ MÔ ĐỘNG VẬT 35
IV.2.1 MÔI TRƯỜNG BM................................................................................................... 35
IV.2.2 MÔI TRƯỜNG EMEM............................................................................... 35
IV.2.3 MÔI TRƯỜNG DMEM.......................................................................................35
IV.2.4 MÔI TRƯỜNG F10, F12............................................................................. 35
IV.2.5 MÔI TRƯỜNG ISCOVE............................................................................. 35
IV.2.6 MÔI TRƯỜNG 5A...................................................................................... 36
IV.2.7 MÔI TRƯỜNG RPMI – 1640 ..................................................................... 36
IV.2.8 MÔI TRƯỜNG 199 ................................................................................................... 36
IV.3 ĐẶC ĐIỂM BA LOẠI MÔI TRƯỜNG EMEM, DMEM VÀ AMNIOMAX ĐƯỢC SỬ DỤNG ĐỂ NUÔI NGUYÊN BÀO SỢI TRONG ĐỀ TÀI NÀY
IV.3.1 MINIMUM ESSENTIAL MEDIUM (MEM) .............................................. 36
IV.3.1.1 MÔ TẢ SẢN PHẨM............................................................................... 36
IV.3.1.2 THÀNH PHẦN MÔI TRƯỜNG EMEM................................................. 37
IV.3.1.3 ĐIỀU KIỆN BẢO QUẢN ....................................................................... 39
IV.3.1.4 CÁCH THỨC SỬ DỤNG........................................................................ 39
IV.3.2 DULBECCO’S MODIFIED EAGLE’S MEDIUM .............................................. 39
IV.3.2.1 MÔ TẢ SẢN PHẨM.................................................................................. 40
IV.3.2.2 THÀNH PHẦN CỦA DMEM..................................................................... 40
IV.3.2.3 ĐIỀU KIỆN BẢO QUẢN .......................................................................... 42
IV.3.2.4 ĐẶC TÍNH MÔI TRƯỜNG ....................................................................... 42
IV.3.3 SẢN PHẨM AMNIOMAX™-C100 ...................................................................... 43
IV.3.3.1 MÔ TẢ SẢN PHẨM...................................................................................... 43
IV.3.3.2 CÔNG THỨC MÔI TRƯỜNG ....................................................................... 43
IV.3.3.3 ĐIỀU KIỆN GIỮ .............................................................................................. 44
IV.3.3.4 CÁCH THỨC SỬ DỤNG ....................................................................................... 44
V. ỨNG DỤNG CỦA VIỆC NUÔI CẤY NGUYÊN BÀO SỢI ....................................... 44
V.1 ỨNG DỤNG TRONG LĨNH VỰC Y HỌC............................................................ 44
V.2 ỨNG DỤNG TRONG DƯỢC KHOA.................................................................... 44
V.3 ỨNG DỤNG TRONG NGHIÊN CỨU SINH HỌC................................................ 44
V.4 ỨNG DỤNG TRONG CHỌN GIỐNG VẬT NUÔI............................................... 45

PHẦN III : PHƯƠNG PHÁP
III.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU................................................................................... 46
III.1 CÁC MỤC TIÊU CẦN ĐƯỢC KHẢO SÁT .......................................................... 46
III.2 TRÌNH TỰ THÍ NGHIỆM....................................................................................... 47
III.3 CÁC QUY TRÌNH CHÍNH ĐƯỢC SỬ DỤNG TRONG THÍ NGHIỆM................. 48
III.3.1 VÔ TRÙNG DỤNG CỤ VÀ HOÁ CHẤT.................................................. 48
III.3.2 VÔ TRÙNG NƠI TIẾN HÀNH THÍ NGHIỆM........................................... 48
III.3.3 CÁC QUY TRÌNH SỬ DỤNG TRONG THÍ NGHIỆM............................... 49
III.3.3.1 THU NHẬN VÀ XỬ LÝ MẪU............................................................... 49
III.3.3.2 PHÂN LẬP VÀ TÁCH KHỐI MÔ ......................................................... 49
III.3.3.3 CÁC QUY TRÌNH NUÔI TẾ BÀO......................................................... 50
III.3.3.4 PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH MẬT ĐỘ TẾ BÀO BẰNG PHỒNG ĐẾM NEUBAUER 51
III.3.3.5 PHƯƠNG PHÁP THAY MÔI TRƯỜNG ............................................. 52
III.3.3.6 CẤY CHUYỀN TẾ BÀO..................................................................... 53
III.3.3.7 CÁCH ĐẾM TẾ BÀO TRÊN QUANG TRƯỜNG 20X....................... 53
III.3.4 DỤNG CỤ – THIẾT BỊ – HÓA CHẤT............................................................ 54
III.3.4.1 DỤNG CỤ ............................................................................................ 54
III.3.4.2 THIẾT BỊ ............................................................................................. 54
III.3.4.3 HÓA CHẤT........................................................................................... 56
III.3.4.4 MÔI TRƯỜNG..................................................................................... 56
PHẦN IV: KẾT QUẢ – BIỆN LUẬN
IV.1 KẾT QUẢ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG PHÁT TRIỂN CỦA NGUYÊN BÀO SỢI TỪ MO NHAU.57
IV.1.1 KẾT QỦA QUAN SÁT MẪU MÔ NHAU THU NHẬN TỪ MỔ NỌI SOI Ở TAY VÒI............57
IV.1.2 KẾT QỦA QUAN SÁT MẪU MÔ NHAU THU NHẬN QUA ĐƯỜNG SANH MỔ Ơ NHAU ĐỦ THÁNG 57
IV.2 KẾT QUẢ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG TĂNG TRƯỞNG CỦA NGUYÊN BÀO SỢI THU NHẬN TỪ MẪU MÔ NHAU SỔ TRÊN CÁC LOẠI MÔI TRƯỜNG KHÁC NHAU. ......... 60
IV.2.1 KẾT QUẢ......................................................................................................... 61
IV.2.1.1 NGÀY THỨ NHẤT ...................................................................................... 61
IV.2.1.2 NGÀY THỨ HAI........................................................................................... 63
IV.2.1.3 NGÀY THỨ BA .......................................................................................... 65
IV.2.1.4 NGÀY THỨ TƯ .......................................................................................... 67
IV.2.1.5 NGÀY THỨ NĂM ...................................................................................... 69

PHẦN V: BÀN LUẬN......................................................................................................... 72

PHẦN VI : KẾT LUẬN........................................................................................................ 77

TÀI LIỆU THAM KHẢO..................................................................................................... 79

PHỤ LỤC ...... ....................................................................................................................... 85